Zentrale Einheit für Mikroskopie

Unsere Expertise

Die Zentrale Einheit für Mikroskopie, kurz ZEIM, stellt die Geräteausstattung und die Expertise in der Präparation biologischer Proben zur Verfügung. Für diese Aufgaben verfügt ZEIM über mehrere Fluoreszenzmikroskope (FM), Konfokale Mikroskope (CLSM), zwei Transmissions-Elektronenmikroskope (TEM) und ein Feldemissions-Rasterelektronenmikroskop (FESEM) sowie die notwendigen peripheren Präparationsgeräte.

Da mikroskopische Experimente meist verschiedenartig verlaufen und besondere Anforderungen erfüllen müssen, kooperiert das Team von ZEIM eng mit den Wissenschaftler:innen, um für das vorgesehene Experiment zugeschnittene Präparationsmethoden und Abbildungstechniken zu etablieren. ZEIM kann dabei auf ein großes Portfolio verschiedener Methoden der Licht- und Elektronenmikroskopie zugreifen. 

Die große Expertise in der elektronenmikroskopischen Präparation biologischer Proben ist eine besondere Stärke unseres EM-Service. Eine weitere Stärke liegt in der morphologischen Beschreibung von neu isolierten Bakterien und Bakteriophagen. Darüber hinaus bietet ZEIM die Möglichkeit, Infektionen mit pathogenen Bakterien an Zelllinien durchzuführen. Dies beinhaltet die anschließende Probenpräparation, Betrachtung und Erstellung von Bildern sowie die Auswertung für Publikationen.

Im Bereich der FM/CLSM werden die Wissenschaftler:innen bei den Aufnahmen am Fluoreszenzmikroskop oder Konfokalen Mikroskop unterstützt oder erhalten eine entsprechende Einweisung zum eigenständigen Aufnehmen von Bildern. Darüber hinaus werden neben klassischen Fluoreszenzmarkierungen auch Doppelmarkierungen zur Unterscheidung extra- und intrazellulärer Bakterien angeboten. 

Transmissionselektronenmikroskopie (TEM)

Neben der schnell auszuführenden Negativ-Kontrastierung zur Darstellung von Bakterien, Bakteriophagen und Vesikeln kommen vielfältige Einbettungstechniken zum Einsatz, zum Beispiel Tieftemperatureinbettungen und Hochdruckgefrieren mit anschließender Gefriersubstitution, um Proben nachfolgend im Ultradünnschnitt mittels TEM zu analysieren. Expertise in der Immunzytochemie ist ebenfalls vorhanden, um Pathogenitätsfaktoren, beispielsweise mit Hilfe von Antikörpern und Goldnanopartikeln in eukaryontischen Zellen oder Bakterien am Ultradünnschnitt nachzuweisen.

AUSSTATTUNG:

• Transmissionselektronenmikroskop Zeiss Libra120 Plus
• Transmissionselektronenmikroskop Zeiss TEM910
• Ultramikrotom Leica UC7 mit Cryokammer FC7
• Ultramikrotom Reichert Ultracut S,
• Hochdruckgefrierer Leica EM-Pact 1
• Bedampfungsanlage Bal-Tec MED 020
• Gefriersubstitution Leica EM AFS

Feldemissions-Rasterelektronenmikroskopie (FESEM)

Für die hochauflösende Feldemissions-Rasterelektronenmikroskopie (FESEM) verwenden wir spezielle ZEIM-Standardprotokolle, die sich für eine erste erfolgreiche Präparation eignen. So können Infektionsprozesse und Oberflächenstrukturen präzise dargestellt werden. Für besondere Fragestellungen werden neue Präparationsansätze getestet und gegebenenfalls etabliert. Auch die FESEM kann mit der Immunzytochemie gekoppelt werden.

AUSSTATTUNG:

• Feldemissions-Rasterelektronenmikroskop Zeiss Merlin mit Atlas, STEM Detektor, EsB-Detektor für Materialkontrast, Shuttle&Find für CLEM (korrelative Licht- und Elektronenmikroskopie) und Oxford EDX Aztec mit X-Max Detektor
• Kritische Punkttrocknungsapparatur Leica EM CPD300
• Sputter Coater Bal-Tec SCD 500

Fluoreszenz (FM)- und Konfokale Laser-Scanningmikroskopie (CLSM)

Die FM/CLSM bietet die Möglichkeit selektiv angefärbte Kompartimente und Elemente in Zellen sichtbar zu machen. Die Anfärbung kann dabei über Fluoreszenzfarbstoffe, fluoreszierende Proteine oder Fluoreszenz-gelabelte Antikörper erfolgen. Der große Vorteil gegenüber der EM: Neben fixierten Proben können auch Aufnahmen von lebenden Präparaten erfolgen. Bei komplexen, dreidimensionalen Strukturen ist dabei die konfokale Laser-Scanning Mikroskopie das Mittel der Wahl, da sie die Möglichkeit optischer Schnitte erlaubt, die im Nachgang wieder zu einem 3D Volumen zusammengesetzt werden können. Eine entsprechende, kommerzielle Software zur Bildanalyse (Imaris 9.3, Oxford Instruments) ist ebenfalls bei ZEIM verfügbar.

AUSSTATTUNG:

• Zeiss Axio Imager A2  
• Zeiss Axio Imager A1
• Zeiss Axio Observer Z1 mit Apotome
• Zeiss Imager Z2  
• Leica SP5 aufrechtes Konfokales Laser-Scanning Mikroskop  
• Leica SP8 inverses Konfokales Laser-Scanning Mikroskop
• Bildanalysesoftware: Imaris version 9.3.